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人非小細胞肺癌細胞A549的傳代及凍存方法

更新時間:2022-12-06 點擊量:1426
  人非小細胞肺癌細胞A549能通過胞苷二磷脂酰膽堿途徑合成富含不飽和脂肪酸的卵磷脂;角蛋白陽性。肺癌是常見的惡性腫瘤之一,已成為我國城市人口惡性腫瘤死亡原因的第1位。非小細胞型肺癌包括鱗狀細胞癌(鱗癌)、腺癌、大細胞癌,與小細胞癌相比其癌細胞生長分裂較慢,擴散轉(zhuǎn)移相對較晚。非小細胞肺癌約占所有肺癌的80%,約75%的患者發(fā)現(xiàn)時已處于中晚期,5年生存率很低。
  
  人非小細胞肺癌細胞A549的傳代方法:
  
  1、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
  
  2、加1mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中,使消化液浸潤所有細胞,將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min(視細胞情況而定),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml全培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中,1000rpm離心5min,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
  
  3、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
  
  人非小細胞肺癌細胞A549的凍存方法:
  
  1、收集細胞及細胞培養(yǎng)液,裝入無菌離心管中,1000rpm條件下離心4min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,加1mL血清重懸細胞,進行細胞計數(shù)。
  
  2、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液,使細胞密度5x106~1x107/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細胞懸液,注意凍存管做好標識。
  
  3、將凍存管放入-80℃冰箱,24h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
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